ELISA (Technique Immuno-Enzymatique) : Principe du test
Principe du test ELISA • Les puits de microplaque en polystyrène coatés avec des antigènes purifiés et biochimiquement caractérisés sont utilisés comme phase solide contenant les antigènes immobilisés.

• Si l'échantillon est positif, les anticorps spécifiques dans l'échantillon de sérum dilué se lient aux antigènes couplés à la phase solide.

• Dans une seconde étape, les anticorps liés sont détectés avec des anticorps anti-immunoglobulines humaines couplés à la peroxydase.

• Dans une troisième étape, les anticorps liés sont rendus visibles en utilisant une solution chromogène/substrat capable de générer une réaction colorée. L'intensité de la coloration produite est proportionnelle à la concentration de l'anticorps dans l'échantillon de sérum.

• L'ELISA "monospécifique" (immuno-dosages enzymatiques avec un seul antigène) fournit un dosage quantitatif in vitro pour la détection des anticorps. L'ELISA "Profil" fournit un dosage semi-quantitatif in vitro pour la détection de différents anticorps sur une seule barrette de microplaque. La phase solide de l'ELISA "Pool" est coatée avec un mélange d'antigènes utilisés pour la détection semi-quantitative des anticorps dont la spécificité doit être analysée ensuite par des dosages monospécifiques.






Bio Advance : les tests ELISA
   
   
microplaque Bio Advance • Réactifs prêts à l'emploi (sauf tampon de lavage concentré).


• Réactifs clairement identifiés par leur coloration :
  • - Rouge sombre: Calibrateur n°1
  • - Rouge: Calibrateur n°2
  • - Rouge clair: Calibrateur n°3
  • - Bleu foncé: Sérum de contrôle positif
  • - Vert: Sérum de contrôle négatif
  • - Bleu clair: Tampon échantillon

• Les conjugués sont identifiables par coloration :
  • - Anti-IgA couplé à la peroxydase : orange
  • - Anti-IgG couplé à la peroxydase : vert
  • - Anti-IgM couplé à la peroxydase : rouge
  • - Anti-IgGM couplé à la peroxydase : turquoise
  • - Anti-IgAGM couplé à la peroxydase : jaune

• Différents tests peuvent être réalisés sur une même microplaque, les temps d'incubation (30 min, 30 min, 15 min) sont identiques pour la majorité des ELISA. Ceci présente un avantage important lors de l'automatisation de ces techniques.

 Incubation à température ambiante.

 Compatibilité avec tous les lecteurs et les laveurs de microplaque et automates ELISA.





ELISA : Evaluation quantitative
Courbe d'étalonnage Bio Advance • 3 sérums de calibration pour les tests quantitatifs :
  • - calibrateur n°1 : limite supérieure de la gamme de mesure
  • - calibrateur n°2 : valeur seuil (= limite des valeurs normales)
  • - calibrateur n°3 : négatif



• 1 sérum de calibration pour les tests semi-quantitatifs.

• 1 fiche de contrôle avec les valeurs cibles pour les calibrateurs et les sérums de contrôle, lot dépendant.

• Interprétation simple par tous les logiciels ELISA.

Barrettes avec puits sécables

 

 

• Barrettes emballées dans un sachet hermétique.

• Barrettes avec puits sécables (sauf pour les ELISA Profil).

• Nom abrégé de l'antigène imprimé sur chaque puits ou barrette afin d'éviter tout risque d'erreur.






       
Mode Opératoire (entièrement automatisable)
       
       
       
       
       
       
       
1 Incubation de l'échantillon   30'


  Par puits, déposer 100 µl de chaque calibrateur (1, 2 et 3) non-dilué, de sérum de contrôle (positif ou négatif) ou de sérum échantillon dilué.
   
   
   
2 Lavage    
  Vider les puits, laver 3 fois avec 300 µl de tampon de lavage
   
   
   
3 Incubation avec le conjugué   30'
  Par puits, déposer 100 µl de conjugué
   
   
   
4 Lavage    
  Vider les puits, laver 3 fois avec 300 µl de tampon de lavage
   
   
   
5 Incubation avec le substrat   15'
  Par puits, déposer 100 µl de solution chromogène/substrat
       
       
       
6 Arrêt    
  Par puits, déposer 100 µl de solution d'arrêt
       
       
       
7 Lecture photométrique    
   Lecture à 450 nm (référence à 620 nm).
A réaliser dans les 30 minutes suivant l'arrêt de la réaction.

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