1. EUROLine : Principe du test

2. Réalisation

3. Evaluation

4. Mode Opératoire (entièrement automatisable)


 

EUROLine : Principe du test
• Les bandelettes présentent plusieurs antigènes purifiés coatés en fines lignes parallèles sur des membranes.

• Si l'échantillon est positif, les anticorps spécifiques présents dans l'échantillon de sérum dilué se lient à un ou plusieurs des antigènes présents sur la bandelette.

• Dans une seconde étape, les anticorps liés sont détectés avec des anticorps anti-immunoglobulines humaines couplés à la phosphatase alcaline (PAL).

• Dans une troisième étape, les anticorps liés sont rendus visibles en utilisant une solution chromogène/substrat qui en présence de l'enzyme est capable de générer une réaction colorée. Si l'échantillon de sérum contient les anticorps spécifiques, une bande sombre intense apparaît au niveau de la ligne de l'antigène correspondant.

• Cette technique permet de détecter plusieurs anticorps lors d'une seule et même réaction.

• La technique EUROLINE peut être automatisée facilement avec EasyBlot, EUROBlotMaster et EUROBlotOne. La lecture et parfois l'interprétation peuvent être réalisées grâce au logiciel EUROLineScan.






Réalisation
   
   

Tests ANA profil 3 incubés
• Une bandelette par sérum analysé.

• Le temps réel pour réaliser le test est d'environ 105 minutes.

• Les incubations peuvent être facilement automatisées.

• Les incubations se font dans des chambres d'incubations fournies dans les kits, à température ambiante et sur un agitateur à bascule.

• Avant la première incubation, les bandelettes EUROLINE sont traitées pendant 5 minutes avec du tampon échantillon*.

• Les résultats peuvent être analysés visuellement, aucun autre investissement (photomètre, …) n'est nécessaire. Un logiciel peut être également utilisé (voir chapitre Instrumentation).

• Les bandes antigéniques sont localisées de manière précise à des emplacements bien définis sur la bandelette, d'où une évaluation plus facile que celle des WESTERNBLOTS.

• Une bande de contrôle permet de valider la qualité de la manipulation sur chaque bandelette.

• Les résultats positifs et négatifs peuvent être facilement différenciés les uns des autres. L'intensité de la coloration des bandes est corrélée au titre en anticorps.

• Les antigènes sont hautement purifiés et généralement isolés par chromatographie d'affinité. Les bandelettes de membrane ne contiennent aucune protéine superflue pouvant générer des résultats non spécifiques.

• Les bandelettes EUROLINE incubées peuvent être conservées pendant longtemps. Les résultats peuvent être facilement documentés.


* s'applique seulement à certains kits EUROLINE

Evaluation


Le logiciel EUROLineScan a été développé afin de permettre l'évaluation des bandelettes EUROLINE. Il facilite la gestion des données, et fourni une documentation détaillée des résultats. Dans un premier temps les bandelettes EUROLINE sont scannées à l'aide d'un scanner de bureau. L'EUROLineScan reconnaît la position des bandelettes, même si elles ont été incorrectement positionnées, identifie les bandes, et mesure leur intensité. Les résultats sont alors sauvegardés avec les images. Une feuille de résultats séparée peut être éditée pour chaque patient.






Mode opératoire automatisable
1
Pipeter
1,5 ml par rigole
Tampon échantillon
Incuber
5 minutes avec agitation sur un agitateur à bascule
 
Pipeter
Vider par aspiration
 
2
Pipeter
1,5 ml par rigole
Echantillons dilués dans le tampon échantillon
Incuber
30 minutes avec agitation sur un agitateur à bascule
 
Laver (x 3)
1,5 ml de tampon
5 minutes d'incubation
Vider la rigole par aspiration
Tampon de lavage
3
Pipeter
1,5 ml par rigole
Conjugué enzymatique
Incuber
30 minutes avec agitation sur un agitateur à bascule
 
Laver (x 3)
1,5 ml de tampon
5 minutes d'incubation
Vider la rigole par aspiration
Tampon de lavage
4
Pipeter
1,5 ml par rigole
Solution chromogène / substrat
Incuber
10 minutes avec agitation sur un agitateur à bascule
 
Laver (x 3)
Rincer avec de l'eau distillée
Vider la rigole par aspiration
Eau distillée
5
Evaluer
Analyse visuelle ou automatisée (EUROLineScan) des bandes
 

 

 

 

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